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乙肝肝炎病毒檢驗中核酸檢測法的應用意義

時間:2019-07-19 來源:中國現代藥物應用 作者:黃永梅 本文字數:3043字

  摘    要: 目的 觀察獻血者乙型肝炎病毒 (HBV) 檢測中應用核酸檢測法 (NAT) 的診斷價值。方法 120份無償獻血合格標本, 分別使用酶聯免疫吸附劑試驗 (ELISA) 與NAT進行診斷。分析ELISA、NAT檢測結果 , 追蹤隨訪NAT呈陽性標本中, 核酸確認為陽性, 但“二對半”檢測結果為陰性和核酸確認陰性獻血者。結果 120份血液標本中, ELISA檢測單試劑陽性2份, 雙試劑陰性118份。120份血液標本中, NAT檢測陰性105份, 陽性14份, 經NAT確認陽性12份, ELISA確認陽性1份。最終確認陽性的13份標本中, 僅2份ELISA檢測為單試劑陽性, 而NAT檢測均為陽性。NAT檢測呈陽性的15份標本中, 對符合條件的獻血者進行追蹤隨訪, ELISA檢測陰性轉化為陽性2例, 該血樣于ELISA窗口期NAT檢測發現, NAT檢測有1例隱匿性HBV感染。結論 NAT在臨床診斷中的靈敏度與特異性較高, 與ELISA存在一定互補性, 在血液篩查中應用可顯著降低漏診發生率, 縮短窗口期, 對確保輸血安全意義重大。

  關鍵詞: 核酸檢測法; 血液標本; 乙肝肝炎病毒;

  核酸檢測法 (nucleic acid detection, NAT) 可直接用于病毒核酸的檢測中, 對于獻血者乙型肝炎篩查具有非常重要的作用。實踐證明, 這種檢測法非常方便、可靠, 近年來在血液篩查中得到了廣泛應用, 可準確檢出多種因素引發的漏檢血液, 大大降低由于輸血導致的感染病毒發生率, 為臨床血液病毒篩查提供了重要檢測手段[1]。本次研究分別利用酶聯免疫吸附劑試驗 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 、NAT檢測本站采集的血液, 重點觀察NAT用于血液標本中乙肝肝炎病毒 (hepatitis b virus, HBV) 檢驗中的價值, 現報告如下。

  1、 材料與方法

  1.1、 材料

  選取2015年11月1日~2018年2月28日本血站無償獻血合格標本120份作為研究對象, 均符合《獻血者健康檢查要求》的相關標準[2], 所有獻血者均經干化學法行谷丙轉氨酶 (ALT) 檢測, 并利用金標試紙法檢測乙型肝炎表面抗原 (HBsAg) , 得到結果均合格。

  1.2、 血液采集方法

  保留ELISA與ALT、離心NAT樣管, 速率3000 r/min, 離心力1600 g, 時間為20 min, 于4℃下儲存備用, 48 h內行檢測。準確記錄好血液采集日期、樣品編碼等信息資料。獲得標本需在2 h內進行處理, 并轉至冰箱內, 確保冰箱溫度在2~8℃, 2~3 h內轉至離心保存, 在24 h內行血清學篩查, 并進行NAT檢測。

  1.3、 檢測方法

  全部嚴格按照操作規程進行各項操作, 所有試劑均確保在有效期內使用, 儀器設備有瑞士哈美頓STAR全自動樣儀、BEHRING全自動酶免后處理機、Cobas s201核酸檢測系統、COBAS AmpliPrep核酸提取儀及COBAS Taqman核酸擴增檢測儀) 。 (1) ELISA檢測:每份血液標本進行HBsAg檢測時均給予2種ELISA試劑, 并在每批實驗中設置陰性對照組、陽性對照組、室內質控品組與空白對照組。檢測結果判斷標準:樣本光密度值與臨界值的比值 (S/CO) ≥1為陽性, 該狀態下血液檢測結果不符合標準;0.5<S/CO<1為灰區, 該狀態下血液檢測結果不符合標準;S/CO<0.5為陰性, 該狀態下血液檢測結果符合標準。 (2) NAT檢測:利用混樣方法檢測核酸。在每級混樣中設置6個標本, 設定內對照, 設定混合測定陰性為陰性, 對混合測定陽性者進行拆分, 如拆分檢測呈陰性則為NAT陰性, 如拆分測定呈陽性, 則為NAT陽性。 (3) 追蹤隨訪:NAT呈陽性標本中, 核酸確認為陽性, 但“二對半”檢測結果為陰性和核酸確認陰性獻血者應進行追蹤隨訪, 2個月后重新采樣。

乙肝肝炎病毒檢驗中核酸檢測法的應用意義

  2 、結果

  2.1、 ELISA檢測結果

  120份血液標本中, ELISA檢測單試劑陽性2份, 雙試劑陰性118份。見表1。

  2.2、 NAT檢測結果

  120份血液標本中, NAT檢測陰性105份, 陽性15份, 經NAT確認陽性12份, ELISA確認陽性1份。最終確認陽性的13份標本中, 僅2份ELISA檢測為單試劑陽性, 而NAT檢測均為陽性。見表1。

  2.3 、追蹤隨訪結果

  NAT檢測呈陽性的15份標本中, 對符合條件的獻血者進行追蹤隨訪, ELISA檢測陰性轉化為陽性2例, 該血樣于ELISA窗口期NAT檢測發現, NAT檢測有1例隱匿性HBV感染。見表1。

  表1 120份血液標本ELISA檢測與NAT檢測結果 (份)
表1 120份血液標本ELISA檢測與NAT檢測結果 (份)

  3、 討論

  HBV病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒均可經過血液傳播, 對人類身體健康存在嚴重威脅, 相關資料顯示, 發展中國家采集的血液中, 約5%~20%的血液中包含上述3種病毒[3], 同時, 每年經輸血與非安全性注射引發的感染HBV的人數高達1600萬人, 并且丙型肝炎感染人數也高達470萬人, 艾滋病毒的感染人數也非常高, 約為16萬人[4], 嚴重阻礙著我國經濟與社會發展。

  HBV是一種通過血液傳播的病毒性傳染病, 對獻血人群進行血液篩查是預防HBV傳播的一條重要途徑。ELISA是臨床診斷HBV使用頻率最高的一種方法, 通常性檢驗指標為HBsAg, 該檢測方法具有便宜、快捷等優點, 因此在血液篩查工作中占據著非常重要的地位[5]。但是因為隱匿性HBV、HBV感染窗口期等問題存在, 臨床檢測中存在較大的HBV漏檢風險。NAT可以為血清學診斷方法提供補充, 該檢測方法是一種新型分子生物學診斷方法, 主要通過對HBV-DNA含量測定, 快速、直接的反映出HBV感染的具體情況, 其檢測結果具有較高的靈敏性, 現在已經在獻血者血液病毒感染篩查工作中得到了廣泛應用。

  輸血是否存在安全性, 其風險主要在于被篩查病毒的“窗口期”, 相關資料顯示, 經NAT檢測可有效減少HBV等“窗口期”, 其減少率可達40%~75%, 大大降低病毒通過輸血傳播的風險[6]。本次研究NAT呈陽性標本中, 核酸確認為陽性, 但“二對半”檢測結果為陰性和核酸確認陰性獻血者進行追蹤隨訪, ELISA測定陰性轉化為陽性2例, 該血樣于ELISA窗口期NAT檢測發現, NAT測定共有1例隱匿性HBV感染者, 可見NAT檢測在血液篩查中具有非常重要的價值。在NAT檢測中, 所用的試劑必須具有比較高的靈敏性和特異性, 并且對實驗環境也提出了比較高的要求, 比其他檢測方法要求更為嚴格, 檢查過程中使用的設備與試劑要求都比較高, 大大提升了血液檢測的成本, 但也加強了血液安全的保障。另外, NAT自身存在一定局限性, 一般如果病毒載量較低時, 利用NAT檢測是很難獲得準確的結果[7,8]。

  綜上所述, 在血液篩查中應用NAT檢測, 可顯著提升血液病毒檢出率, 為確保血液安全提供保證, 值得在臨床上推廣。NAT可以有效縮減“窗口期”, 同時減少通過輸血途徑傳播病毒的風險性, 但是在臨床診斷中也會出現漏檢標本。在實施NAT時, 應對病毒核酸加以重點關注, 而ELISA則為抗原或抗體, 以上兩種檢測方法體現的檢測原理與方法上存在一定差異, 因此, 這兩種檢測方法在血液標本檢測中不存在重復性, 體現為一定的互補性, 均為血液篩查中非常重要的檢測方法。

  參考文獻

  [1]寇存山.乙型肝炎病毒感染患者的乙肝病毒脫氧核糖核酸和血清學指標的檢驗結果分析.臨床檢驗雜志 (電子版) , 2018, 7 (4) :734.
  [2]王可可, 楊柯, 趙俊, 等.基于微流控芯片的熒光定量PCR法快速檢測乙肝病毒核酸.分析科學學報, 2018, 34 (4) :450-454.
  [3]耿貴華.核酸檢測技術在臨沂市無償獻血人群HBV感染檢測中的應用分析.菏澤醫學專科學校學報, 2018, 30 (2) :26-27, 49.
  [4]陳建仁, 李馳, 關惠恒.超敏熒光定量PCR法核酸檢測與乙肝兩對半聯用在乙肝防控中的臨床應用.中國實用醫藥, 2018, 13 (9) :83-85.
  [5]鄭劍婷.核酸檢測與酶聯免疫吸附檢測在無償獻血血液標本乙肝病毒篩查中的應用比較.按摩與康復醫學, 2018, 9 (3) :91-92.
  [6]馬艷華.酶聯免疫吸附試驗對乙型肝炎表面抗原陰性獻血者核酸篩查及降低輸血傳播乙型肝炎病毒效果分析.中國醫學工程, 2017, 25 (10) :40-42.
  [7]王志宏, 李輝.核酸檢測法對血液標本內乙肝病毒的檢測價值分析.河北醫學, 2016, 22 (12) :2097-2099.
  [8]師延娟.研究核酸檢測法對血液標本內乙肝病毒的檢測價值.中西醫結合心血管病雜志 (電子版) , 2018 (20) :55-56.

    黃永梅.核酸檢測法檢測血液標本內乙肝病毒的價值分析[J].中國現代藥物應用,2019,13(13):33-35.
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